第一节 蛋白质的提取和分离
[课标要求]尝试蛋白质的提取和分离 [知识梳理]一．背景知识 1．常用的蛋白质分离提纯技术有 和 等。其中 技术最为快捷灵敏，简便易行。 2．电泳现象： 。 3．电泳技术分离蛋白质的原理： 。 4．聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）： 。 二．实践案例――血清蛋白的提取和分离 1．材料用具（略） 2．活动程序 （1）点样： 新配制血清5μL，与 质 量 浓 度 为0.4g/mL的 蔗 糖 溶 液 及 质 量 分 数为 的 指示剂等体积混匀后，用 加样器吸取5μL样品，小心加到电泳样品槽的胶面上。 （2）．电泳：打开稳压稳流电泳仪的电源，将电流调节至 mA，待样品进入分离胶后，改为 mA,当溴酚蓝前沿距离硅胶框下缘 时，将电流调回零。关闭电源。 （3）．染色：取出凝胶，放入质量分数为 的 中，染色与 同时进行，使染色液没过胶板，染色 。 （4）．脱色：用体积分数为 的 浸泡漂洗数次，每隔 更换脱色液，直至底色脱净，背景清晰。 （5）．烘干胶板：将已脱色的凝胶板放在保存液中浸泡 然后将凝胶板放在两层透气玻璃纸中间，自然干燥即可获得血清蛋白的电泳谱带。 3．结果分析 （1）分析没有出现电泳谱带的原因 （2）通过辨认电泳谱带可初步判断血清中蛋白质的种类 三．探究活动 1．牛奶中酪蛋白的提取和检测 提取原理：当pH= 时，酪蛋白的溶解度降低，并析出沉淀。用 除去酪蛋白中的脂肪后，即得到纯的酪蛋白。 检测原理：酪蛋白中的酪氨酸，能与 起颜色反应，首先生成白色沉淀，加热后变成 。 2．卵清蛋白的分离 用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离（同上） 四．意义 1．胰岛素的提纯 2．对细胞癌变做出诊断 [复习指导]本节课复习以聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）为例，以电泳技术分离蛋白质的原理为基础，注重电泳技术的主要的步骤，明确点样、染色、脱色等在整个实验中的地位，明确各步骤所用试剂以及它们的作用。 [典题解析]下列叙述正确的是（ ） A．蛋白质中含有游离的氨基，是碱性电解质 B．蛋白质中含有游离的羧基，是酸性电解质 C．蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相同的电极方向移动 D．蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动 [解析] 电泳技术分离蛋白质的原理：蛋白质中既含有游离的氨基，又含有羧基，属于两性电解质，并且蛋白质在一定pH条件下带有电荷，作为带电离子，蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动。 [答案] D。