作者：李成，杨长青，朱彩凤，戈延茹
【关键词】 红景天；,,多糖；,,正交设计法；,,提取
摘要：目的选择红景天多糖的最佳提取工艺。方法采用正交设计法筛选红景天多糖最佳提取工艺，用苯酚-硫酸比色法测定其含量。结果红景天多糖的最佳提取工艺为，用10倍的水，提取3次，1 h/次。测得红景天多糖的含量为5.012 6%，平均回收率为99.39%，RSD为0.81%（n=6）。结论该方法简便，准确，灵敏度高，适用于红景天多糖的提取和纯化。
关键词：红景天； 多糖； 正交设计法； 提取
Study on the Optimum Extracting Method of Polysaccharide from Rhodioloside
Abstract：ObjectiveTo select the optimum extracting method of polysaccharide from Rhodioloside. MethodsTo select the optimum extracting method by using orthogonal design and the determination of polysaccharide was taken by phenol-sulfuric acid method. ResultsThe optimum extract method of the polysaccharide was determined by orthogonal design:the solvent was water and the material was 10∶1, extracted 3 times,each time was 1 hour.The polysaccharide's content by the optimum extracting method was 5.012 6%,the average recovery was 99.39%(n=6), relative standard deviation was 0.81%. ConclusionThis method was simple, accurate and had a good sensitivity, and was suitable for the extraction and determination of polysaccharide Rhodiola sachalinensis.
Key words:Rhodiola sachalinensis; Polysaccharide; Orthogonal design; Extraction
高山红景天Rhodiola sachalinensis A.Bor.是景天科红景天属的多年生草本植物，被载于《长白山植物药志》和《中国植物志》中，具有类似中医扶正固本的“适应原样”作用。高山红景天中主要含有红景天苷( Rhodioloside,C14H2OO7)和苷元 〔1〕以及多糖、脂肪、蜡、甾醇、酚类化合物、黄酮、有机酸、水溶性挥发油、18种氨基酸以及铁、钙、镁、铜、铬、硒等35种无机元素〔2〕。现代药理研究表明红景天多糖对血糖具有双向调节作用，同时还具有调节免疫，抗肿瘤，抗衰老等功效〔3〕。为了有效地利用这一药用资源，本研究采用正交实验法对提取方法进行了筛选，并测定了红景天多糖的含量。
1 仪器与材料
722 分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；电子天平（上海精科天平）；循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；旋转蒸发器（上海青浦沪西仪器厂）；电动离心机（金坛市恒丰仪器厂）；电子恒温水浴锅（中国深圳国华仪器厂）；电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。高山红景天（延边长白山红景天种植有限公司）；其它化学试剂均为国产分析纯。
2 方法与结果
2.1 红景天多糖含量测定方法的建立〔4~6〕
2.1.1 标准曲线的绘制精称葡萄糖标准品100.0 mg，加适量水溶解，转移至100 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即为葡萄糖标准溶液。再将其浓度稀释100倍，制成对照品溶液。精密吸取葡萄糖标准溶液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 ml定容至100 ml，得2.5，5.0，10，20，30，40 mg/L不同浓度的溶液。分别取0.5 ml，各加入苯酚试剂0.5 ml，加水2.5 ml，迅速滴加浓硫酸3.5 ml。以随行试剂为空白液。在水浴中煮沸15 min，取出，冷却15 min后，于490 nm处测其吸光度值。以吸光度对葡萄糖浓度线性回归，得回归方程为Y＝0.016X+0.054 3(r＝0.998 9)。实验表明，葡萄糖在2.5~40 mg/L范围内呈现良好的线性关系。
2.1.2 精密度实验精密吸取葡萄糖对照品溶液0.5 ml，同2.1.1操作，测定吸收度，重复6次，RSD为1.38%，说明本方法精密度良好。
2.1.3 稳定性实验取葡萄糖对照品溶液0.5 ml 4份，分别在0.5，1，2，3 h测其吸光度值，RSD为0.752%，说明葡萄糖对照品溶液在3 h内稳定。
2.1.4 加样回收率实验分别吸取葡萄糖对照品溶液6份，置已知含量的供试品溶液中,按2.1.1条件测定。测得平均回收率为99.39%，RSD为0.81%。
2.1.5 换算因子测定准确称取精制红景天多糖10 mg，用水溶解，定容于100 ml容量瓶中，吸取0.5 ml，按2.1.1条件操作，求出多糖含量，重复6次，然后按下式计算换算因子f，f＝W/(C×D)，W：多糖重量（mg），C：多糖液中葡萄糖的浓度（mg/L），D：多糖的稀释倍数。结果换算因子f平均为4.19，RSD为1.8%。
2.2 红景天多糖提取工艺的优化〔7，8〕
2.2.1 提取方法的考察因素与水平据文献调研及预实验结果，采用水煮沸浸提，其中加入的溶剂量，提取时间，提取次数对实验结果有影响，因此本实验采用正交设计法L9（34）表，以红景天多糖含量为考察指标进行实验。
表1 正交设计水平（略）
2.2.2 红景天浸出液的制备将红景天粉碎，称取5.0 g，浸泡12 h，分别按L9（34）表进行提取，将提取液过滤，浓缩至10 ml，加入80%乙醇使沉淀，静置12 h，过滤。将沉淀物用30 ml水溶解，置50 ml容量瓶中，加水至刻度，得红景天多糖样品液。
2.2.3 样品中红景天多糖含量测定精密吸取红景天多糖样品液1 ml，放入50 ml容量瓶中，加水至刻度。用2.1.1条件进行测定,按下式计算红景天多糖的含量。结果见表2。多糖含量=（C×D×f/W）×100%其中C为样品液中葡萄糖的重量，D为稀释倍数，f为换算因子，W为样品的生药量。实验结果表明，因素A对红景天多糖的提取有显著影响，其次为因素C，因素B对红景天多糖的提取没有影响。考虑到生产中的经济成本问题，选择最佳方案为A2B1C3，即用10倍的水，提取3次，1 h/次。按照此最佳工艺进行提取，测得含量为5.012 6%。